RGS6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404102

Panoramica

RGS6 (Regulator of G protein signaling 6) codifica una proteina con attività di attivazione della GTPasi che accelera la terminazione della segnalazione mediata da GPCR promuovendo l’idrolisi del GTP della subunità Gα, modulando così l’ampiezza e la durata delle vie dipendenti da cAMP/PKA e di altri pathway mediati da proteine G eterotrimeriche. Oltre alla regolazione canonica dei GPCR, RGS6 è stato implicato nel controllo delle risposte allo stress cellulare, della funzione mitocondriale e della segnalazione apoptotica, con ruoli riportati nella fisiologia neuronale e cardiaca. Un’attività o un’espressione deregolata di RGS6 è stata associata ad alterazioni della neurotrasmissione e dell’omeostasi della segnalazione nei tessuti in cui predominano i circuiti GPCR, supportando lo studio in modelli di neurobiologia e di segnalazione cardiovascolare. Queste funzioni rendono RGS6 un bersaglio utile per studiare il rimodellamento delle vie a valle dei GPCR e degli effettori accoppiati alle proteine G.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RGS6 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RGS6 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RGS6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RGS6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RGS6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RGS6 per lo studio della segnalazione di RGS6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RGS6 critici per la funzione di RGS6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RGS6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RGS6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RGS6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RGS6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RGS6 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RGS6 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RGS6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RGS6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.