Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (h) Rb: sc-400116-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Rb consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Rb (h) y el plásmido de doble nickasa Rb (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a RB1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Rb Anticuerpo (IF8): sc-102
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Rb | sc-400116-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Rb | sc-400116-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RB1 codifica la proteína del retinoblastoma (Rb), un supresor tumoral central que frena la progresión del ciclo celular de G1/S al unirse y reprimir a los factores de transcripción E2F y coordinar programas transcripcionales necesarios para la replicación del ADN. La actividad de Rb se regula de forma dinámica mediante la fosforilación por ciclina D–CDK4/6 y ciclina E–CDK2, integrando la señalización mitogénica con los puntos de control, la regulación de la cromatina y la diferenciación celular. A través de sus vínculos con las respuestas al daño del ADN, la senescencia y la apoptosis, RB1 ayuda a mantener la estabilidad genómica y controla la capacidad proliferativa. La alteración de la función de RB1 es recurrente en distintos tipos de cáncer y constituye la lesión definitoria en el retinoblastoma, lo que convierte a RB1 en un nodo clave de las vías que gobiernan la oncogénesis y las decisiones de destino celular.
Rb El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RB1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.