RANTES CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m2): sc-422845-KO-2

概要

マウスのCcl5はRANTES（CCL5）をコードしており、活性化T細胞、NK細胞、マクロファージ、血小板などから分泌されるケモカインです。CCR1、CCR3、CCR5を介したシグナル伝達によって白血球のトラフィッキング（遊走・集積）を誘導します。RANTESによる走化性は炎症細胞のリクルートを形成し、免疫細胞と内皮細胞の相互作用を促進するとともに、組織リモデリングや抗ウイルス応答に影響するサイトカインネットワークを調整します。Ccl5/RANTESの活性はNF-κBやインターフェロン関連プログラムとも交差し、骨髄系細胞の分極やリンパ球エフェクターの局在を調節し得ます。Ccl5シグナルの破綻は、マウスにおける慢性炎症・自己免疫モデル、神経炎症、代謝性炎症、ならびに腫瘍免疫微小環境のダイナミクスに関与することが示唆されています。

RANTES CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）は、mouse細胞株におけるCcl5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ccl5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ccl5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RANTESタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RANTESシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ccl5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RANTESの機能に不可欠なCcl5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ccl5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RANTES CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRANTES CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ccl5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RANTES HDRプラスミド（m）および RANTES HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCcl5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCcl5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。