RANTES CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401806-ACT

CCL5 kodiert das Chemokin RANTES, einen sezernierten Liganden für CCR1, CCR3 und CCR5, der während entzündlicher Antworten die Rekrutierung, Adhäsion und Aktivierung von Leukozyten koordiniert. Die RANTES-Signalübertragung aktiviert GPCR-abhängige Kaskaden, die mit Chemotaxis, Integrinaktivierung, Calciumfluss sowie nachgeschalteten MAPK- und PI3K-Signalwegen zusammenlaufen und so das Trafficking von Immunzellen im Gewebe prägen. Eine dysregulierte CCL5-Expression ist mit chronisch entzündlichen Mikroumgebungen und veränderter Immunüberwachung assoziiert und ist daher relevant für Studien zu Autoimmunität, infektionsassoziierter Immundynamik und Tumor–Immun-Interaktionen. In humanen Systemen wird CCL5/RANTES häufig im Kontext der Kommunikation zwischen myeloiden Zellen und T-Zellen, von Zytokinnetzwerken und des stromal-immunologischen Crosstalks untersucht.

RANTES Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CCL5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

RANTES Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CCL5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CCL5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen RANTES-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CCL5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von RANTES-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des RANTES-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CCL5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.