Plásmido CRISPR de Activación (h) RAGE: sc-400284-ACT

El gen humano **AGER** codifica el receptor para productos finales de glicación avanzada (**RAGE**), un receptor de reconocimiento de patrones multiligando de la superfamilia de las inmunoglobulinas que se une a los **AGEs**, **S100/calgranulinas**, **HMGB1** y **amiloide-β**. La señalización de RAGE amplifica las respuestas inflamatorias y de estrés a través de las vías **NF-κB**, **MAPK/ERK**, **JNK/p38** y **PI3K/AKT**, promoviendo la producción de citocinas, el estrés oxidativo y cambios en la adhesión y la migración celular. Contribuye a la activación endotelial y al reclutamiento de leucocitos, vinculando señales metabólicas e inflamatorias con la remodelación tisular. La actividad desregulada de **AGER/RAGE** se ha asociado con disfunción vascular relacionada con la diabetes, aterosclerosis, inflamación crónica, neurodegeneración e inflamación asociada a tumores, lo que lo convierte en un nodo común para estudios de vías y biomarcadores.

RAGE El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AGER sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RAGE El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AGER en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AGER, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RAGE. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AGER y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RAGE en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RAGE en células tumorales con expresión de AGER silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.