PTPMT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403905

Panoramica

PTPMT1 codifica una fosfatasi tirosinica proteica localizzata nei mitocondri che defosforila il fosfatidilglicerofosfato, supportando la biosintesi della cardiolipina e l’integrità della membrana mitocondriale interna. Regolando l’organizzazione, dipendente dalla cardiolipina, dei supercomplessi della catena respiratoria, PTPMT1 influenza la fosforilazione ossidativa, la dinamica mitocondriale e l’omeostasi energetica cellulare. La sua attività si interseca con i processi di rimodellamento lipidico e con le vie di risposta allo stress mitocondriale che modulano proliferazione e sopravvivenza in cellule con elevate richieste metaboliche. La disregolazione del metabolismo lipidico mitocondriale legato a PTPMT1 è stata associata ad alterazioni della bioenergetica e dell’equilibrio redox, rendendolo rilevante per studi sull’adattamento metabolico e sulla disfunzione mitocondriale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PTPMT1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PTPMT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PTPMT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PTPMT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PTPMT1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PTPMT1 per lo studio della segnalazione di PTPMT1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PTPMT1 critici per la funzione di PTPMT1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PTPMT1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PTPMT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PTPMT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PTPMT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PTPMT1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PTPMT1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PTPMT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PTPMT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.