Plásmido CRISPR de Activación (h) PTPMT1: sc-403905-ACT

PTPMT1 codifica una fosfatasa de tirosina proteica localizada en la mitocondria, situada en la membrana mitocondrial interna, que regula el metabolismo de los fosfolípidos, en particular la desfosforilación del fosfatidilglicerofosfato durante la biosíntesis de cardiolipina. Al modular la composición de la cardiolipina, PTPMT1 influye en la función de la cadena de transporte de electrones, la arquitectura de la membrana mitocondrial y la homeostasis energética, con efectos posteriores sobre el equilibrio redox y la susceptibilidad a la apoptosis. La alteración de la actividad de PTPMT1 se ha relacionado con defectos en la respiración mitocondrial y con la reprogramación metabólica, procesos que con frecuencia se implican en la biología del cáncer y en los mecanismos de las enfermedades cardiometabólicas. En consecuencia, PTPMT1 se estudia en vías que conectan la señalización lipídica mitocondrial con la fosforilación oxidativa, la mitofagia y las respuestas al estrés.

PTPMT1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PTPMT1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PTPMT1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PTPMT1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PTPMT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PTPMT1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PTPMT1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PTPMT1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PTPMT1 en células tumorales con expresión de PTPMT1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.