Plasmide CRISPR/Cas9 KO PSGL-1 (m): sc-422874

Présentation

Selplg code pour le ligand glycoprotéique 1 de la P‑sélectine (PSGL‑1), une sialomucine de type mucine exprimée à la surface des leucocytes, qui se lie aux sélectines afin de médiater l’accrochage initial, le roulement et l’adhésion ferme sur l’endothélium activé et les plaquettes. Grâce à une glycosylation régulée et à la sulfation de résidus tyrosine, PSGL‑1 s’intègre aux mécanismes d’adhérence et à la signalisation induite par les chimiokines pour coordonner le trafic leucocytaire, l’extravasation et la formation de la synapse immunologique. PSGL‑1 participe aux cascades inflammatoires en modulant le recrutement des neutrophiles, les interactions monocytes–endothélium et les agrégats plaquettes–leucocytes, reliant l’inflammation vasculaire à l’activation immunitaire. Un dérèglement de la fonction SELPLG/PSGL‑1 a été associé à des altérations de la défense de l’hôte et à des pathologies inflammatoires, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques sur la migration des leucocytes et les processus liés à l’immunothrombose.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PSGL-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Selplg dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Selplg, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Selplg à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PSGL-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Selplg pour l'étude de la signalisation de PSGL-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Selplg essentiels à la fonction de PSGL-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Selplg pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PSGL-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PSGL-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Selplg. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PSGL-1 plasmide HDR (m) et le PSGL-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Selplg pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Selplg définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.