Plásmido Doble Nickase (h) PSF: sc-402024-NIC

SFPQ codifica el factor de empalme rico en prolina y glutamina (PSF), un factor nuclear multifuncional de unión a ARN y ADN que acopla la transcripción con el empalme del pre-ARNm, el procesamiento del extremo 3′ y la retención nuclear de ARN. PSF participa en el ensamblaje y la regulación de los paraspeckles mediante interacciones con el lncRNA NEAT1 y proteínas relacionadas de la familia DBHS, influyendo en programas de expresión génica durante respuestas al estrés. Más allá del metabolismo del ARN, PSF contribuye al mantenimiento del genoma modulando la reparación de roturas de doble cadena del ADN y procesos asociados a la replicación mediante interacciones proteína–proteína en los sitios de daño. La desregulación o la localización alterada de SFPQ se ha vinculado con un empalme aberrante y un control transcripcional anómalo observados en cáncer y neurodegeneración, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar en células humanas mecanismos de enfermedad dependientes del procesamiento de ARN.

PSF El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SFPQ en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SFPQ. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SFPQ. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SFPQ alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.