PSF Double Nickase Plasmid (h): sc-402024-NIC

SFPQ kodiert den splicing factor proline- and glutamine-rich protein (PSF), einen multifunktionalen nukleären RNA- und DNA-bindenden Faktor, der die Transkription mit dem pre-mRNA-Spleißen, der 3′-End-Prozessierung und der nukleären Retention von RNA koppelt. PSF ist über Interaktionen mit der lncRNA NEAT1 und verwandten Proteinen der DBHS-Familie an der Assemblierung und Regulation von Paraspeckles beteiligt und beeinflusst dadurch Genexpressionsprogramme während Stressantworten. Über den RNA-Stoffwechsel hinaus trägt PSF zur Aufrechterhaltung der Genomintegrität bei, indem es die Reparatur von DNA-Doppelstrangbrüchen sowie replikationsassoziierte Prozesse durch Protein–Protein-Interaktionen an Schadensstellen moduliert. Eine Dysregulation oder veränderte Lokalisation von SFPQ wurde mit aberrantem Spleißen und gestörter transkriptioneller Kontrolle in Krebs und Neurodegeneration in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung RNA‑prozessierungsabhängiger Krankheitsmechanismen in humanen Zellen macht.

PSF Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SFPQ-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SFPQ abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SFPQ-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SFPQ-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.