PSF Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402024-ACT

L’SFPQ umano codifica la proteina PSF, un fattore nucleare multifunzionale in grado di legare RNA e DNA che coordina la regolazione trascrizionale, lo splicing del pre‑mRNA e la maturazione dell’estremità 3′ dell’RNA. PSF partecipa alla dinamica dei paraspeckle e dei corpi nucleari attraverso interazioni con lncRNA e partner leganti l’RNA, modellando programmi di espressione genica in risposta a stress e segnali di differenziamento. Contribuisce inoltre al mantenimento del genoma influenzando la segnalazione della risposta al danno al DNA e la scelta delle vie di riparo, collegando l’elaborazione dell’RNA a processi associati alla cromatina. La deregolazione dei complessi ribonucleoproteici associati a SFPQ/PSF è stata riportata in contesti caratterizzati da alterata fedeltà dello splicing, instabilità genomica e controllo trascrizionale aberrante, temi frequentemente indagati nella ricerca su cancro e neurodegenerazione.

PSF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SFPQ senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PSF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SFPQ nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SFPQ, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PSF. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SFPQ nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PSF nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PSF nelle cellule tumorali con espressione di SFPQ silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.