Plasmide CRISPR d'Activation (h) Protein S: sc-401491-ACT

PROS1 code la protéine S humaine, une glycoprotéine plasmatique dépendante de la vitamine K qui agit comme cofacteur essentiel de la protéine C activée en favorisant l’inactivation protéolytique des facteurs de coagulation Va et VIIIa, limitant ainsi la génération de thrombine. La protéine S interagit également avec l’inhibiteur de la voie du facteur tissulaire (TFPI) et se lie aux surfaces phospholipidiques de manière dépendante du calcium, établissant un lien entre la biologie des membranes et le contrôle anticoagulant. Par ces activités, PROS1 participe à l’hémostase, à l’homéostasie vasculaire et aux interactions avec l’inflammation ; une expression ou une fonction altérée est associée à des phénotypes de coagulation dérégulés et à une susceptibilité thrombotique. Au-delà de la coagulation, la signalisation de la protéine S via les voies des récepteurs TAM a été impliquée dans l’efférocytose et la modulation immunitaire, ce qui souligne son intérêt dans les domaines de la recherche vasculaire et inflammatoire.

Protein S Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PROS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Protein S Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PROS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PROS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Protein S. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PROS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Protein S au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Protein S dans les cellules tumorales présentant une expression de PROS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.