prefoldin 3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423658

Panoramica

Vbp1 codifica la prefoldina 3, un componente co-chaperone della macchina di tipo prefoldina che sostiene l’omeostasi proteica nel citosol aiutando il ripiegamento e la stabilizzazione di specifiche proteine “client”. La prefoldina 3 contribuisce a reti di proteostasi collegate all’organizzazione del citoscheletro, all’assemblaggio di complessi macromolecolari e al coordinamento con vie chaperoniche che limitano il misfolding proteico in condizioni di stress cellulare. Attraverso questi processi, l’attività di Vbp1 può influenzare la progressione del ciclo cellulare, l’adattamento allo stress e l’equilibrio tra ripiegamento e degradazione delle proteine. La deregolazione delle vie associate alle chaperoni è rilevante in modelli di stress proteotossico e neurodegenerazione, nei quali una capacità di ripiegamento e un controllo qualità alterati possono modificare fenotipi associati alla malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO prefoldin 3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Vbp1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Vbp1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Vbp1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina prefoldin 3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Vbp1 per lo studio della segnalazione di prefoldin 3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Vbp1 critici per la funzione di prefoldin 3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Vbp1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal prefoldin 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal prefoldin 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Vbp1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal prefoldin 3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR prefoldin 3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Vbp1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Vbp1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.