PP2A-Cβ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400937-ACT

PPP2CB codifica a isoforma beta da subunidade catalítica C da fosfatase proteica 2A (PP2A), uma importante fosfatase de serina/treonina que contrabalança a sinalização de quinases ao desfosforilar diversos substratos. Holoenzimas de PP2A contendo PP2A-Cβ regulam a progressão do ciclo celular, as respostas a danos no DNA, a dinâmica do citoesqueleto e o controle metabólico por meio de vias que incluem PI3K–AKT, MAPK e Wnt/β-catenina. Ao moldar a fidelidade de sinais dependentes de fosforilação, PPP2CB contribui para a manutenção da homeostase celular e para a adaptação ao estresse. Alterações na atividade da PP2A ou na composição de suas subunidades são frequentemente associadas a desregulação da proliferação e da sinalização de sobrevivência, sustentando o uso da modulação de PPP2CB para estudar mecanismos relevantes para a biologia do câncer e a neurobiologia.

PP2A-Cβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PPP2CB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PP2A-Cβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PPP2CB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PPP2CB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PP2A-Cβ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PPP2CB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PP2A-Cβ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PP2A-Cβ em células tumorais com expressão de PPP2CB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.