Plásmido CRISPR de Activación (h) POT1: sc-403275-ACT

POT1 (protección de telómeros 1) codifica un componente central del complejo shelterina que se une al ADN telomérico monocatenario y regula la protección de los extremos teloméricos. Al controlar el acceso de la telomerasa y limitar la señalización inapropiada de daño en el ADN dependiente de ATR en los extremos de los cromosomas, POT1 ayuda a mantener la homeostasis de la longitud telomérica y la estabilidad del genoma. La alteración de la función de POT1 se asocia con disfunción telomérica, estrés replicativo e inestabilidad cromosómica, procesos que influyen en la senescencia celular y la transformación oncogénica. Como factor de mantenimiento de telómeros, POT1 se estudia ampliamente en vías que regulan la replicación del ADN, la respuesta al daño y el procesamiento de los extremos cromosómicos.

POT1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de POT1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

POT1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus POT1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional POT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de POT1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo POT1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de POT1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía POT1 en células tumorales con expresión de POT1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.