Plasmide CRISPR d'Activation (m) PON2: sc-436004-ACT

Le gène murin *Pon2* code la paraoxonase 2 (PON2), une lactonase intracellulaire associée aux membranes, dotée d’une activité antioxydante qui limite la peroxydation des lipides et atténue la signalisation liée au stress oxydatif. PON2 contribue au maintien de l’homéostasie des mitochondries et du réticulum endoplasmique, en modulant des voies régulées par l’état redox et impliquées dans l’apoptose, l’inflammation et le métabolisme cellulaire. Des modifications de l’expression de PON2 ont été associées à des processus pertinents pour l’athérosclérose, les dérégulations métaboliques et la biologie tumorale, où le stress oxydatif et l’oxydation des lipides participent à la pathologie. Dans des modèles murins, la modulation de *Pon2* permet des études mécanistiques des réponses au stress, de l’activation immunitaire et de la gestion des lipides dans des tissus à forte demande métabolique.

PON2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Pon2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PON2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Pon2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Pon2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PON2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Pon2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PON2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PON2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Pon2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.