Particules Lentivirales d'Activation (h) Polycystin-1: sc-400983-LAC

PKD1 code la polycystine-1, une grande protéine de type récepteur associée à la membrane, qui forme avec la polycystine-2 un complexe mécanorécepteur régulant la signalisation calcique dans les cils primaires et au niveau des jonctions cellule–cellule. La polycystine-1 influence la polarité épithéliale, la morphogenèse tubulaire et les interactions avec la matrice extracellulaire, en intégrant des signaux qui convergent vers des voies telles que la signalisation dépendante du Ca2+, la modulation de l’AMPc et le remodelage du cytosquelette. La perturbation de la fonction de PKD1 est fortement liée à la polykystose rénale autosomique dominante, dans laquelle une mécanotransduction altérée et une organisation épithéliale perturbée contribuent à l’initiation et à l’expansion des kystes. Plus largement, l’activité de PKD1 est étudiée dans des contextes liés à l’architecture tissulaire, à la signalisation associée aux ciliopathies et aux réponses cellulaires au stress mécanique.

Les particules d'activation lentivirales Polycystin-1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PKD1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Polycystin-1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PKD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Polycystin-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PKD1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.