Partículas Lentivirales de Activación (h) Pol III RPC32: sc-417072-LAC

POLR3G codifica la RPC32 de la polimerasa III (Pol III), una subunidad central de la ARN polimerasa III que sustenta la transcripción de pequeños ARN no codificantes, incluidos los ARNt, el ARNr 5S y otros ARN reguladores esenciales para la capacidad de traducción, el crecimiento celular y la proteostasis. RPC32 contribuye al ensamblaje del complejo Pol III y al inicio dependiente del promotor, integrándose con vías que acoplan la detección de nutrientes y la señalización proliferativa con la producción biosintética. La actividad alterada de Pol III y la producción desregulada de pequeños ARN se estudian con frecuencia en el contexto de la transformación oncogénica, las respuestas al estrés celular y la señalización inmunitaria innata desencadenada por especies de ARN citosólicas. Por tanto, POLR3G ofrece un punto de entrada mecanístico para investigar el control transcripcional de la biogénesis de ARN no codificantes y su impacto en las decisiones sobre el estado celular.

Las partículas de activación lentiviral Pol III RPC32 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de POLR3G en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Pol III RPC32 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción POLR3G, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Pol III RPC32. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo POLR3G y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.