Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PMS2 Plasmide Double Nickase (m): sc-422324-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PMS2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PMS2 Double Nickase Plasmid (m) e il PMS2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Pms2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PMS2 Antibody (B-3): sc-25315
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PMS2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-422324-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Pms2 codifica PMS2, un componente centrale del complesso MutLα con MLH1 che coordina la riparazione dei mismatch del DNA in seguito a errori di replicazione. PMS2 fornisce un’attività endonucleasica che aiuta ad avviare le fasi di escissione e risintesi, collegando il riconoscimento del mismatch alla riparazione a valle tramite interazioni con PCNA, EXO1 e le DNA polimerasi. Attraverso questi processi, PMS2 contribuisce alla stabilità del genoma, alla soppressione dell’instabilità dei microsatelliti e al mantenimento della corretta progressione del ciclo cellulare. L’alterazione della funzione di PMS2 è associata a tassi di mutazione elevati ed è stata implicata in sindromi di predisposizione al cancro e in meccanismi patologici più ampi legati alla riparazione del DNA, rendendola un bersaglio chiave per lo studio della mutagenesi e delle risposte ai checkpoint in modelli murini.
PMS2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Pms2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Pms2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Pms2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Pms2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.