PMS2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422324

Descripción general

El gen Pms2 de ratón codifica la proteína PMS2, un componente central del complejo de reparación de errores de apareamiento MutLα junto con MLH1, que corrige desajustes base–base y bucles de inserción–deleción que surgen durante la replicación del ADN. PMS2 aporta actividad endonucleasa que coordina las etapas de escisión y resíntesis, lo que favorece la estabilidad del genoma y una señalización adecuada del daño en el ADN. Por su papel en la reparación posreplicativa y en el mantenimiento de la integridad de los microsatélites, la alteración de la función de PMS2 se asocia con tasas elevadas de mutación y con respuestas desreguladas al estrés replicativo. En investigación, la perturbación de Pms2 se utiliza para modelar la deficiencia en la reparación de desajustes y para estudiar la acumulación de mutaciones, la comunicación cruzada entre vías de reparación del ADN y las respuestas de los puntos de control.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PMS2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pms2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pms2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pms2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PMS2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pms2 para la investigación de la señalización de PMS2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pms2 críticos para la función de PMS2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pms2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PMS2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PMS2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pms2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PMS2 (m) y el plásmido HDR PMS2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pms2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pms2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.