Plásmido CRISPR de Activación (m) PMP22: sc-422323-ACT

El gen Pmp22 en ratón codifica la proteína de mielina periférica 22 (PMP22), una glicoproteína tetraspan de membrana enriquecida en las células de Schwann y en la mielina compacta del sistema nervioso periférico. PMP22 contribuye a la formación y el mantenimiento de la vaina de mielina al influir en la organización de la membrana, la diferenciación de las células de Schwann y las vías de proteostasis que controlan el plegamiento y el tráfico de las proteínas de la mielina. Las alteraciones en la dosis de PMP22 perturban la dinámica de la mielinización y las interacciones axón–glía, lo que convierte a Pmp22 en un locus clave para estudiar los mecanismos de las neuropatías periféricas, las respuestas al estrés en la glía mielinizante y las redes de señalización relacionadas con la mielina. En modelos murinos, la modulación de la expresión de Pmp22 se utiliza habitualmente para analizar los efectos de la dosis génica sobre la estabilidad de la mielina, las propiedades de conducción nerviosa y los programas transcripcionales posteriores.

PMP22 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Pmp22 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PMP22 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Pmp22 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Pmp22, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PMP22. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Pmp22 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PMP22 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PMP22 en células tumorales con expresión de Pmp22 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.