PLAG1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-407190-ACT

PLAG1 kodiert einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der Genexpressionsprogramme reguliert, welche Zellwachstum, Differenzierung und entwicklungsbiologische Musterbildung steuern. In menschlichen Zellen kann PLAG1 mitogene und metabolische Zielgene wie IGF2 hochregulieren und ist damit an Signalwegen beteiligt, die Proliferation und Gewebeumbau koordinieren. Eine dysregulierte PLAG1-Expression wird bei der Tumorentstehung wiederholt beobachtet, häufig durch Promotor-Austausch oder Translokationen, die eine abnorme transkriptionelle Aktivität antreiben. Diese Eigenschaften machen PLAG1 zu einem geeigneten Knotenpunkt für die Untersuchung der transkriptionellen Kontrolle von Wachstumsfaktor-Signalgebung, Zellzyklusprogression und onkogenen genregulatorischen Netzwerken.

PLAG1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PLAG1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PLAG1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PLAG1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PLAG1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PLAG1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PLAG1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PLAG1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PLAG1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PLAG1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.