PKC lambda/iota Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422263

Visão geral

Prkci codifica a isoforma atípica da proteína quinase C, PKC lambda/iota, uma quinase de serina/treonina que atua a jusante de complexos de polaridade como PAR3–PAR6 e contribui para o estabelecimento da polaridade ápico-basal, a organização das junções oclusivas (tight junctions) e a divisão celular assimétrica. A PKC lambda/iota integra sinais provenientes de vias reguladas por PI3K e por pequenas GTPases para coordenar a remodelação do citoesqueleto, o tráfego vesicular e a morfogênese epitelial. Em modelos murinos, alterações na atividade de Prkci têm sido associadas à desorganização da arquitetura tecidual e a programas aberrantes de desenvolvimento e de células imunes, o que a torna relevante para estudos sobre integridade epitelial, diferenciação e sinalização responsiva ao estresse. Seu papel central em vias de polaridade e controle de crescimento também relaciona a desregulação de Prkci a mecanismos frequentemente investigados em biologia do câncer e em contextos de pesquisa metabólica.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PKC lambda/iota (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Prkci em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Prkci, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Prkci na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PKC lambda/iota.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Prkci para a investigação da sinalização de PKC lambda/iota, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Prkci críticos para a função PKC lambda/iota
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Prkci para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PKC lambda/iota Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PKC lambda/iota Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Prkci. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PKC lambda/iota Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PKC lambda/iota (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Prkci para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Prkci definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.