Plásmido Doble Nickase (h) PKC gamma: sc-400503-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PKC gamma consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PKC gamma (h) y el plásmido de doble nickasa PKC gamma (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PRKCG. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PKC gamma Anticuerpo (C-4): sc-166385
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PKC gamma | sc-400503-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PKC gamma | sc-400503-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKCG codifica la proteína quinasa C gamma (PKCγ), una quinasa de serina/treonina enriquecida en neuronas, activada por Ca2+ y diacilglicerol, que acopla la señalización de membrana al control de la excitabilidad y la función sináptica dependiente de la fosforilación. PKCγ integra señales ascendentes procedentes de la fosfolipasa C para modular la remodelación del citoesqueleto, el tráfico vesicular y la transcripción dependiente de la actividad mediante vías que convergen con MAPK/ERK y otras cascadas de quinasas. En tejidos humanos, PRKCG se expresa en niveles elevados en el sistema nervioso central, donde la alteración de la señalización de PKCγ y las variantes codificantes se han asociado con fenotipos neurodegenerativos y del neurodesarrollo. La perturbación experimental de PRKCG se utiliza habitualmente para desentrañar mecanismos de transducción de señales que gobiernan la plasticidad neuronal, la actividad de redes y los cambios del proteoma impulsados por la fosforilación.
PKC gamma El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PRKCG en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PRKCG. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PRKCG. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PRKCG alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.