PKA Iα reg Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422400

Descripción general

Prkar1a codifica la subunidad reguladora alfa de tipo I de la proteína quinasa A (PKA) dependiente de AMPc, un regulador negativo clave que se une a las subunidades catalíticas y limita la actividad de la quinasa hasta que el AMPc induce la disociación del holoenzima. Al controlar la señalización de PKA, PRKAR1A influye en programas de fosforilación que regulan el metabolismo, la progresión del ciclo celular, la diferenciación y las respuestas transcripcionales aguas abajo de las vías GPCR–adenilil ciclasa–AMPc. En sistemas murinos, la alteración de Prkar1a modifica la dinámica de la vía AMPc/PKA con efectos posteriores sobre la expresión génica regulada por CREB y un crosstalk de señalización más amplio, incluidos procesos asociados a MAPK. La desregulación de PRKAR1A y de la señalización AMPc/PKA se ha vinculado a fenotipos endocrinos y de control del crecimiento, lo que la convierte en un objetivo relevante para estudiar mecanismos de enfermedad dependientes de la señalización in vivo y en células cultivadas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PKA Iα reg (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Prkar1a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Prkar1a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Prkar1a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PKA Iα reg.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Prkar1a para la investigación de la señalización de PKA Iα reg, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Prkar1a críticos para la función de PKA Iα reg
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Prkar1a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PKA Iα reg CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PKA Iα reg CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Prkar1a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PKA Iα reg (m) y el plásmido HDR PKA Iα reg (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Prkar1a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Prkar1a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.