Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PI 3-kinase p110γ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401043
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PI 3-kinase p110γ Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PI 3-kinase p110γ, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PI 3-kinase p110γ Antibody (D-12): sc-166365
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PI 3-kinase p110γ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401043 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
PIK3CG codifica la subunità catalitica p110γ della fosfoinositide 3-chinasi (PI3K) di classe IB, un mediatore chiave della segnalazione dei fosfoinositidi guidata dai GPCR nelle cellule ematopoietiche e in altri tipi cellulari. La PI3-chinasi p110γ fosforila i lipidi fosfatidilinositolo per generare PIP3, promuovendo programmi di sopravvivenza dipendenti da AKT, il rimodellamento del citoscheletro e la chemiotassi direzionata tramite effettori a valle quali PDK1, mTOR e regolatori delle piccole GTPasi. Questa via integra segnali provenienti da recettori per le chemochine, recettori del complemento e mediatori infiammatori per controllare l’attivazione dei leucociti, la migrazione e il burst ossidativo. Una segnalazione PIK3CG deregolata è stata implicata in risposte infiammatorie anomale e nella disfunzione delle cellule immunitarie, ed è inoltre studiata nel contesto delle interazioni tumore–immunità e della segnalazione nel microambiente.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PI 3-kinase p110γ (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PIK3CG in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PIK3CG insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PIK3CG a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PI 3-kinase p110γ.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PIK3CG per lo studio della segnalazione di PI 3-kinase p110γ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni PIK3CG critici per la funzione di PI 3-kinase p110γ
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PIK3CG per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PI 3-kinase p110γ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PI 3-kinase p110γ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PIK3CG. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PI 3-kinase p110γ Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PI 3-kinase p110γ (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PIK3CG per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PIK3CG definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.