Peroxin 3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425227

Descripción general

Pex3 codifica la peroxina 3, un factor central de la biogénesis de peroxisomas que se localiza en la membrana peroxisomal y ayuda a iniciar el ensamblaje de la membrana al reclutar peroxinas adicionales necesarias para la importación de proteínas de la matriz. A través de su papel en la formación de peroxisomas, PEX3 contribuye a vías metabólicas de lípidos, incluida la β‑oxidación de ácidos grasos de cadena muy larga, la síntesis de fosfolípidos éter (plasmalógenos) y la desintoxicación de especies reactivas de oxígeno. La pérdida de la función peroxisomal altera la homeostasis redox celular y la composición lipídica de las membranas, lo que afecta la comunicación con las mitocondrias y la señalización inflamatoria. En ratones, Pex3 se estudia con frecuencia para modelar defectos en la biogénesis de peroxisomas y para analizar cómo la pérdida de peroxisomas influye en el neurodesarrollo, el metabolismo hepatocelular y el balance energético sistémico.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Peroxin 3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pex3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pex3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pex3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Peroxin 3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pex3 para la investigación de la señalización de Peroxin 3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pex3 críticos para la función de Peroxin 3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pex3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Peroxin 3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Peroxin 3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pex3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Peroxin 3 (m) y el plásmido HDR Peroxin 3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pex3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pex3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.