Plásmido CRISPR de Activación (h) Per1: sc-401260-ACT

El gen humano **PER1** codifica el regulador circadiano Period 1 (Per1), un componente central del reloj molecular que genera ritmos de casi 24 horas mediante bucles de retroalimentación transcripcional–traduccional. Per1 participa en la regulación circadiana de la expresión génica en vías que controlan la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN, el metabolismo y la señalización endocrina, interactuando con la transcripción impulsada por CLOCK/ARNTL y con la represión mediada por CRY. La alteración de la expresión o de la ritmicidad de PER1 se ha asociado con trastornos del ritmo circadiano y se ha descrito en estudios de biología tumoral, fenotipos relacionados con el estado de ánimo y desregulación metabólica, lo que refleja efectos amplios sobre los mecanismos celulares de temporización. Dado que PER1 vincula señales ambientales con programas transcripcionales aguas abajo, se utiliza con frecuencia para investigar redes controladas por el reloj y fenotipos celulares dependientes del momento del día.

Per1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PER1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Per1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PER1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PER1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Per1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PER1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Per1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Per1 en células tumorales con expresión de PER1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.