PDE6β Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-422166-LAC

Il gene murino **Pde6b** codifica la subunità β della fosfodiesterasi 6 del cGMP dei fotorecettori a bastoncelli (PDE6β), un effettore centrale della cascata di fototrasduzione rodopsina–trasducina. In seguito all’attivazione indotta dalla luce, PDE6β catalizza l’idrolisi del cGMP, riducendo il cGMP intracellulare e favorendo la chiusura dei canali regolati dal cGMP, contribuendo così a modellare la risposta elettrica del fotorecettore. Questo asse di segnalazione governa l’omeostasi di cGMP e Ca²⁺ nei segmenti esterni dei bastoncelli e si integra con processi a valle che influenzano la sopravvivenza dei fotorecettori e la funzione dei circuiti retinici. L’alterazione del turnover del cGMP dipendente da PDE6β è fortemente associata a fenotipi di degenerazione retinica ereditaria, rendendo **Pde6b** un bersaglio chiave per studi meccanicistici sulla funzione dei bastoncelli e sullo squilibrio di segnalazione correlato alla malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale PDE6β (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Pde6b in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PDE6β (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Pde6b, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PDE6β. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Pde6b e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.