PDE2A Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401957-LAC

Il gene umano **PDE2A** codifica la fosfodiesterasi 2A, una fosfodiesterasi dei nucleotidi ciclici a doppio substrato che idrolizza sia cAMP sia cGMP, contribuendo così a determinare l’ampiezza e la compartimentalizzazione dei secondi messaggeri. PDE2A è stimolata dal legame del cGMP al suo dominio regolatorio GAF, consentendo un cross-talk da cGMP a cAMP che influenza la segnalazione PKA/PKG, l’attività dei canali ionici e le risposte trascrizionali dipendenti dalla fosforilazione. Attraverso il controllo della segnalazione dei nucleotidi ciclici, PDE2A contribuisce all’eccitabilità neuronale e alla plasticità sinaptica, nonché ai programmi di segnalazione cardiovascolari e infiammatori. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di PDE2A sono state associate alla biologia di malattie neuropsichiatriche e neurodegenerative e a una segnalazione cardiometabolica disfunzionale, a supporto della sua utilità come nodo di via per la ricerca meccanicistica.

Le particelle di attivazione lentivirale PDE2A (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PDE2A in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PDE2A (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PDE2A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PDE2A. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PDE2A e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.