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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO PDC-E2 (h) | sc-402520 | 20 µg | $397.00 | |||
Plasmid HDR PDC-E2 (h) | sc-402520-HDR | 20 µg | $445.00 |
DLAT code la sous-unité E2 (dihydrolipoamide acétyltransférase) du complexe pyruvate déshydrogénase, également appelé PDC‑E2, un assemblage enzymatique mitochondrial qui convertit le pyruvate en acétyl‑CoA, reliant ainsi la glycolyse au cycle de l’acide tricarboxylique. En tant qu’acyltransférase dépendante du lipoate, PDC‑E2 permet le flux de carbone vers le métabolisme oxydatif et soutient la production d’ATP, l’anaplérose et l’approvisionnement en précurseurs biosynthétiques. L’activité de DLAT est étroitement liée à l’équilibre rédox mitochondrial et au choix des voies métaboliques, en particulier en situation de stress nutritionnel ou de fortes exigences prolifératives. Des perturbations des composants du complexe pyruvate déshydrogénase ont été associées à un remodelage métabolique et à une dysfonction mitochondriale, pertinents pour les phénotypes neurodéveloppementaux et la recherche sur la bioénergétique des cellules cancéreuses.
Le PDC-E2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DLAT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide du pool co-exprime un sgRNA unique, ciblant un site distinct au sein du locus DLAT, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes, et code pour la GFP afin de permettre l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès. Cette stratégie multi-guide augmente la probabilité d'induire des décalages de cadre ou des délétions produisant un knock-out fonctionnel, offrant ainsi une alternative plus robuste aux approches à guide unique. Les cassures double brin (DSB) induites à plusieurs sites sont résolues par jonction non homologue (NHEJ) ou, lorsqu'elles sont utilisées avec le modèle donneur HDR inclus, par réparation dirigée par homologie (HDR) à un site cible défini au sein du locus.
Lorsqu'il est utilisé en conjonction avec le donneur HDR exprimant la RFP, les fluorescences GFP et RFP peuvent être utilisées conjointement pour distinguer les populations de cellules transfectées de celles éditées, rationalisant ainsi les workflows de tri par cytométrie en flux et de sélection de clones.
Pour les applications nécessitant des clones knock-out confirmés et sélectionnables, le PDC-E2 plasmide HDR (h) comprend une construction donneuse HDR contenant une cassette de résistance à la puromycine (PuroR) et un rapporteur protéine fluorescente rouge (RFP), flanquée de bras d'homologie spécifiques à un site cible DLAT défini.
Lorsqu'il est co-transfecté avec le plasmide PDC-E2 CRISPR/Cas9 KO (h):
La construction donneuse HDR comporte des sites loxP flanquant la cassette de sélection PuroR-RFP afin de permettre une suppression propre du marqueur après confirmation du clone. L'expression transitoire de la recombinase Cre via le vecteur Cre inclus Cre Vector: sc-418923 excise la cassette, laissant un site loxP résiduel minimal au sein du locus DLAT et éliminant les effets de confusion potentiels sur les tests en aval.
Cette approche en deux étapes :
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.