PBR Plasmide Double Nickase (h): sc-401624-NIC

TSPO, noto anche come recettore periferico delle benzodiazepine (PBR), è una proteina di 18 kDa della membrana esterna mitocondriale che partecipa al trasporto del colesterolo, alla steroidogenesi e alla regolazione della permeabilità mitocondriale e della bioenergetica. È funzionalmente collegato alle risposte mitocondriali allo stress, all’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno e alla segnalazione apoptotica, ed è ampiamente utilizzato come marcatore molecolare dell’attivazione microgliale e della neuroinfiammazione. Alterazioni dell’espressione di TSPO e della sua localizzazione mitocondriale sono state associate a processi infiammatori e neurodegenerativi, nonché al metabolismo e alla proliferazione delle cellule tumorali. In quanto nodo associato ai mitocondri, TSPO rappresenta un punto di accesso pratico per studiare il dialogo incrociato tra traffico lipidico, stress ossidativo e segnalazione dell’immunità innata.

PBR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TSPO nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TSPO. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TSPO. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TSPO interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.