Particules Lentivirales d'Activation (h) Pax-8: sc-401757-LAC

PAX8 code Pax-8, un facteur de transcription à domaine « paired box » requis pour la spécification de lignée et la différenciation des cellules folliculaires thyroïdiennes, de l’épithélium rénal et des tissus dérivés des canaux de Müller. Pax-8 régule des programmes géniques contrôlant l’identité épithéliale, l’organogenèse et la biosynthèse hormonale, notamment des réseaux transcriptionnels gouvernant des gènes spécifiques de la thyroïde et des voies de signalisation du développement. Une expression altérée de PAX8 ou des événements de fusion sont associés à la tumorigenèse dans des contextes thyroïdiens et rénaux, tandis qu’une perturbation germinale a été liée à l’hypothyroïdie congénitale et à des anomalies du développement urogénital. Dans des modèles cellulaires, l’activité de PAX8 influence les états de la chromatine et les circuits transcriptionnels qui façonnent la prolifération, la différenciation et les sorties métaboliques.

Les particules d'activation lentivirales Pax-8 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PAX8 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Pax-8 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PAX8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Pax-8. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PAX8 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.