Partículas Lentivirales de Activación (h) PATZ1: sc-404881-LAC

PATZ1 (zinc finger 1 que contiene POZ/BTB y AT-hook) es un factor de transcripción nuclear que se une a ADN rico en AT e interactúa con complejos reguladores de la cromatina para modular programas de expresión génica que controlan la proliferación, la diferenciación y la apoptosis. A través de su dominio BTB/POZ y sus módulos de unión al ADN tipo dedo de zinc, PATZ1 participa tanto en la represión como en la activación transcripcional, influyendo en el control del ciclo celular, el compromiso de linaje y las vías de respuesta al estrés. La alteración de la expresión o la función de PATZ1 se ha asociado con fenotipos oncogénicos y del desarrollo, incluidos redes transcripcionales desreguladas que afectan la biología tumoral y la plasticidad celular. Como regulador dependiente del contexto, PATZ1 ofrece un punto de entrada útil para desentrañar circuitos impulsados por factores de transcripción, el control epigenético y la robustez de redes génicas en células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PATZ1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PATZ1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PATZ1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PATZ1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PATZ1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PATZ1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.