PARD6B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425492

Descripción general

Pard6b codifica PARD6B, un componente central del complejo de polaridad PAR que coopera con PRKCZ/PRKCI y PARD3 para establecer la polaridad apicobasal y organizar las uniones epiteliales. A través de su acoplamiento a CDC42 y de la regulación del citoesqueleto de actina, PARD6B influye en el ensamblaje de las uniones estrechas (tight junctions), la división celular asimétrica y la migración dirigida durante el desarrollo y la homeostasis tisular. La alteración de la señalización del complejo PAR se asocia de forma amplia con defectos en la función de barrera epitelial y con una morfogénesis desregulada, procesos que con frecuencia se ven modificados en modelos de progresión tumoral y metástasis. En sistemas murinos, Pard6b se estudia comúnmente en el contexto de la señalización dependiente de la polaridad, la remodelación de uniones y la especificación de linajes.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PARD6B (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pard6b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pard6b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pard6b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PARD6B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pard6b para la investigación de la señalización de PARD6B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pard6b críticos para la función de PARD6B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pard6b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PARD6B CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PARD6B CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pard6b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PARD6B (m) y el plásmido HDR PARD6B (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pard6b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pard6b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.