P5CR2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406048

Descripción general

PYCR2 codifica la pirrolina-5-carboxilato reductasa 2 (P5CR2), una enzima mitocondrial que cataliza la reducción dependiente de NAD(P)H de la pirrolina-5-carboxilato a prolina, lo que sostiene la biosíntesis de prolina y el equilibrio redox celular. Esta actividad vincula el metabolismo de aminoácidos con la función mitocondrial, las respuestas al estrés oxidativo y el mantenimiento de la proteostasis mediante el ciclo dependiente de prolina y la homeostasis de NADP+/NADPH. La alteración de PYCR2 se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y disfunción celular relacionada con la mitocondria, por lo que resulta relevante para estudios del control metabólico en el sistema nervioso. Por ello, PYCR2 se investiga con frecuencia en vías que conectan el metabolismo mitocondrial, la adaptación al estrés y la regulación del crecimiento.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO P5CR2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PYCR2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PYCR2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PYCR2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína P5CR2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PYCR2 para la investigación de la señalización de P5CR2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PYCR2 críticos para la función de P5CR2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PYCR2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido P5CR2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido P5CR2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PYCR2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR P5CR2 (h) y el plásmido HDR P5CR2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PYCR2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PYCR2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.