Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (m) p53: sc-423509-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)p53 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa p53 (m) y el plásmido de doble nickasa p53 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Trp53. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: p53 Anticuerpo (A-1): sc-393031
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) p53 | sc-423509-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) p53 | sc-423509-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Trp53 del ratón codifica p53, un factor de transcripción específico de secuencia que integra señales de daño en el ADN y de estrés oncogénico para mantener la estabilidad del genoma. p53 regula la detención del ciclo celular, la apoptosis, la senescencia y los programas de reparación del ADN a través de vías que incluyen la señalización ATM/ATR–CHK1/CHK2 y el control transcripcional de dianas como Cdkn1a (p21), Bax y Mdm2. La alteración de Trp53 perturba el control de los puntos de control (checkpoints) y las redes transcripcionales inducidas por estrés, por lo que es un elemento central en los estudios sobre biología de supresores tumorales, tolerancia a mutaciones y respuestas celulares al estrés genotóxico. En modelos murinos, el estado de Trp53 influye de forma marcada en la transformación, la vigilancia inmunitaria y la homeostasis tisular, lo que respalda investigaciones mecanísticas en procesos relacionados con el cáncer y el envejecimiento.
p53 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Trp53 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Trp53. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Trp53. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Trp53 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.