Plásmido Doble Nickase (h) P2Y9: sc-404862-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)P2Y9 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa P2Y9 (h) y el plásmido de doble nickasa P2Y9 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a LPAR4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) P2Y9 | sc-404862-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) P2Y9 | sc-404862-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LPAR4 (también conocido como P2Y9) codifica un receptor acoplado a proteína G sensible al ácido lisofosfatídico (LPA), que se acopla a proteínas G heterotriméricas para modular la señalización de segundos mensajeros. La activación del receptor puede influir en la actividad de las GTPasas de la familia Rho, en la dinámica del calcio intracelular y en la señalización MAPK/ERK, conectando señales lipídicas extracelulares con la remodelación del citoesqueleto, la migración y programas de supervivencia celular. La expresión y la señalización de LPAR4 se han investigado en contextos en los que las vías del LPA moldean el comportamiento de células inmunitarias, la biología vascular y las interacciones dentro del microambiente tumoral. La actividad desregulada del eje LPA–LPAR se ha asociado con señalización inflamatoria y con fenotipos proliferativos e invasivos alterados, lo que respalda estudios mecanísticos de redes dependientes del receptor.
P2Y9 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LPAR4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LPAR4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LPAR4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LPAR4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.