Plásmido Doble Nickase (h) p19 INK4D/CDKN2D: sc-401761-NIC

CDKN2D codifica p19 INK4D, un inhibidor de quinasas dependientes de ciclina que se une preferentemente a CDK4 y CDK6 para frenar la fosforilación de RB1 dependiente de ciclina D y hacer cumplir el punto de control G1/S. Al limitar la transcripción impulsada por E2F, p19 INK4D integra señales antiproliferativas con la salida del ciclo celular y programas de diferenciación, también en linajes hematopoyéticos y neuronales. La función de CDKN2D se entrecruza con la señalización mitogénica RAS–MAPK y con vías sensibles al estrés que convergen en la actividad de CDK y el control de puntos de control. La regulación alterada de la familia INK4 y de componentes de la vía de RB se implica con frecuencia en la proliferación desregulada en modelos celulares relevantes para distintas enfermedades, lo que convierte a CDKN2D en un nodo útil para estudiar el control del ciclo celular y los mecanismos de supresión del crecimiento.

p19 INK4D/CDKN2D El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDKN2D en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDKN2D. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDKN2D. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDKN2D alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.