Plasmide Double Nickase (h) p120: sc-400943-NIC

CTNND1 code pour la p120-caténine (p120), une protéine à répétitions armadillo qui se lie aux cadhérines classiques et les stabilise au niveau des jonctions d’adhérence, afin de réguler l’adhérence cellule–cellule et l’intégrité de la barrière épithéliale. En modulant le renouvellement des cadhérines, p120 influence le remodelage des jonctions, la dynamique du cytosquelette et la signalisation des GTPases de la famille Rho, qui coordonne la polarité et la motilité cellulaires. CTNND1 interagit aussi avec les voies Wnt/β-caténine et celles répondant aux facteurs de croissance, via ses rôles dans l’homéostasie des jonctions d’adhérence et la régulation transcriptionnelle par l’intermédiaire de Kaiso. Une dérégulation de la fonction de CTNND1/p120 et une altération de la signalisation jonctionnelle sont associées à une organisation épithéliale anormale et à des phénotypes invasifs, étudiés en biologie du cancer comme dans les troubles du développement.

p120 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CTNND1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CTNND1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CTNND1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CTNND1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.