OX2R Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425439-ACT

O Cd200r1 de camundongo codifica o OX2R (receptor CD200 1), um receptor imunorregulador inibitório expresso predominantemente por células da linhagem mieloide, incluindo macrófagos, células dendríticas e micróglia. A ligação do OX2R ao seu ligante CD200 promove sinalização dependente de ITIM, que recruta fosfatases como SHP-1/2 para atenuar cascatas pró-inflamatórias, restringindo assim a produção de citocinas, a ativação de fagócitos e as funções de apresentação de antígenos. Por essas vias, o Cd200r1 contribui para a manutenção da tolerância imunológica e da homeostase tecidual em sítios de barreira e no sistema nervoso central. A desregulação da sinalização CD200–OX2R tem sido implicada em modelos de neuroinflamação, autoimunidade, imunopatologia associada a infecções e evasão imunológica tumoral, tornando-a um ponto útil para dissecar a biologia de checkpoints mieloides.

OX2R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cd200r1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OX2R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cd200r1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cd200r1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OX2R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cd200r1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OX2R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OX2R em células tumorais com expressão de Cd200r1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.