osteopontin/OPN/SPP1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423134-ACT

マウスのSpp1はオステオポンチン（OPN/SPP1）をコードしており、分泌性のリン酸化糖タンパク質であるOPNは、細胞外マトリックスにも結合して細胞の接着、遊走、生存を制御する。OPNはインテグリンおよびCD44を介してシグナルを伝達し、フォーカルアドヒージョンのダイナミクス、細胞骨格の再編成、さらにPI3K–AKT、MAPK、NF-κBなどの下流経路を調節することで、炎症反応や組織リモデリング応答を形成する。OPNは骨芽細胞系譜細胞、マクロファージ、その他の間質／免疫系コンパートメントで産生され、骨の石灰化、免疫細胞のリクルート、線維化に伴うマトリックスリモデリングに寄与する。Spp1発現の異常は、マウス疾患モデルにおいて、炎症性疾患、がんの浸潤・転移の生物学、ならびに骨格・腎臓の病態生理としばしば関連づけられている。

osteopontin/OPN/SPP1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Spp1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

osteopontin/OPN/SPP1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Spp1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSpp1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性osteopontin/OPN/SPP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSpp1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるosteopontin/OPN/SPP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSpp1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるosteopontin/OPN/SPP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。