Plásmido CRISPR de Activación (h) Osteoglycin: sc-403018-ACT

OGN codifica la osteoglicina, un proteoglucano pequeño rico en leucina de la matriz extracelular que se une a las fibrillas de colágeno y modula el ensamblaje de la matriz, la resistencia tensil del tejido y la señalización célula–matriz. La osteoglicina influye en la disponibilidad de factores de crecimiento y en la señalización de receptores en los compartimentos estromales, vinculando la remodelación de la matriz extracelular con programas celulares como la adhesión, la migración y la diferenciación. La alteración de la expresión de OGN se ha asociado con la remodelación fibrótica y con una renovación desregulada de la matriz extracelular, y se examina con frecuencia en contextos como la remodelación cardiovascular, la biología del estroma tumoral y la reparación de heridas. Estas funciones hacen de OGN una diana útil para analizar cómo la composición y la organización de la matriz determinan la homeostasis tisular y los microambientes asociados a la enfermedad.

Osteoglycin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de OGN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Osteoglycin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus OGN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional OGN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Osteoglycin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo OGN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Osteoglycin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Osteoglycin en células tumorales con expresión de OGN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.