osteocalcin Plasmide Double Nickase (h): sc-400299-NIC

BGLAP codifica l’osteocalcina, una proteina della matrice extracellulare γ-carbossilata e vitamina K–dipendente, secreta dagli osteoblasti e incorporata nell’idrossiapatite durante la mineralizzazione ossea. L’osteocalcina partecipa ai programmi di differenziazione degli osteoblasti e ai processi di rimodellamento osseo coordinati con la trascrizione guidata da RUNX2, la deposizione della matrice di collagene e l’omeostasi di calcio/fosfato. Un’alterata espressione di BGLAP o la maturazione dell’osteocalcina sono frequentemente utilizzate come indicatore dello stato osteogenico e sono state associate a un turnover osseo disregolato in condizioni quali osteoporosi, osteomalacia e osteolisi associata a tumori. In quanto marcatore associato alla matrice, l’osteocalcina supporta studi meccanicistici sullo sviluppo scheletrico, sulle dinamiche di mineralizzazione e sulla segnalazione del microambiente in modelli di biologia dell’osso.

osteocalcin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BGLAP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BGLAP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BGLAP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BGLAP interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.