Plasmide CRISPR d'Activation (h) OLFML3: sc-404425-ACT

OLFML3 (olfactomédine‑like 3) code une glycoprotéine sécrétée associée à la matrice extracellulaire, impliquée dans le remodelage du microenvironnement tissulaire et la régulation des interactions cellule–matrice. Dans les cellules humaines, OLFML3 a été associé à des voies contrôlant la signalisation angiogénique, l’adhérence cellulaire et le dialogue entre le stroma et le système immunitaire, avec des rôles décrits dans le développement vasculaire et l’organisation de la matrice extracellulaire. Une expression altérée d’OLFML3 a été observée dans de multiples contextes pathologiques, notamment dans le stroma associé aux cancers et dans des situations inflammatoires, ce qui soutient son intérêt comme nœud mécanistique pour étudier des phénotypes pilotés par le microenvironnement. La modulation expérimentale d’OLFML3 est donc pertinente pour analyser comment des régulateurs sécrétés de la MEC influencent la migration, le comportement endothélial et les réseaux de signalisation dans des cultures complexes et des systèmes de co‑culture.

OLFML3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de OLFML3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

OLFML3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus OLFML3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription OLFML3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de OLFML3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus OLFML3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de OLFML3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie OLFML3 dans les cellules tumorales présentant une expression de OLFML3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.