Plásmido CRISPR de Activación (h) NRSF: sc-418578-ACT

El factor de transcripción silenciador de RE1 (REST), también conocido como factor silenciador restrictivo neuronal (NRSF), es un represor transcripcional con dedos de zinc que se une a elementos RE1/NRSE para regular amplias redes génicas que controlan la diferenciación neuronal, la función sináptica y la transcripción dependiente de la actividad. Al reclutar complejos correpresores como CoREST, HDACs y enzimas modificadoras de la cromatina, REST configura estados epigenéticos y modula programas de procesamiento de ARN en contextos neurales y no neurales. La regulación dependiente de REST se entrecruza con la remodelación de la cromatina, la expresión de canales iónicos y las vías de respuesta al estrés que influyen en decisiones de destino celular y en la excitabilidad. La actividad desregulada de REST/NRSF se ha implicado en fenotipos del neurodesarrollo y neurodegenerativos, así como en la biología tumoral, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para estudiar la represión transcripcional y los circuitos génicos neuronales en células humanas.

NRSF El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de REST sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NRSF El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus REST en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional REST, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NRSF. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo REST y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NRSF en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NRSF en células tumorales con expresión de REST silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.