Plásmido Doble Nickase (h) NRAMP 2: sc-418176-NIC

SLC11A2 codifica NRAMP2 (DMT1), un transportador de metales divalentes acoplado a protones que media la captación celular de hierro ferroso y otros metales de transición a través de las membranas endosomal y plasmática. NRAMP2 favorece la liberación de hierro dependiente de transferrina desde los endosomas y contribuye al manejo sistémico del hierro en conjunto con ferrirreductasas y la maquinaria de exportación de hierro, lo que lo vincula con la homeostasis del hierro, el equilibrio del estrés oxidativo y la regulación metabólica. La actividad alterada de SLC11A2 se asocia con trastornos del metabolismo del hierro, incluida la anemia microcítica y fenotipos de sobrecarga de hierro en tejidos, y se ha estudiado en contextos como la neurodegeneración y la inflamación, donde el tráfico de metales puede modular la vulnerabilidad celular. En células humanas, la función de NRAMP2 se cruza con vías que gobiernan la endocitosis, el reciclaje lisosomal de metales y la regulación génica sensible al hierro.

NRAMP 2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SLC11A2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SLC11A2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SLC11A2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SLC11A2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.