Partículas Lentivirales de Activación (h) NQO1: sc-400326-LAC

NQO1 (NAD(P)H quinona deshidrogenasa 1) es una flavoproteína citosólica que cataliza la reducción de quinonas a hidroquinonas mediante una transferencia de dos electrones, limitando el ciclo redox y la generación de especies reactivas de oxígeno. Como enzima de detoxificación canónica regulada por NRF2/KEAP1, NQO1 contribuye a la homeostasis redox celular y se relaciona con el metabolismo de xenobióticos, las respuestas al estrés oxidativo y la proteostasis mediante la estabilización de determinadas proteínas. Las alteraciones en la expresión y la actividad de NQO1 se han vinculado con variaciones en la susceptibilidad al daño oxidativo y con una biología tumoral dependiente del contexto, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de carcinogénesis y adaptación al estrés. NQO1 también se utiliza con frecuencia como lectura de activación de la vía en la señalización del elemento de respuesta antioxidante (ARE) y en programas transcripcionales inducidos por electrófilos.

Las partículas de activación lentiviral NQO1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de NQO1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral NQO1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción NQO1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de NQO1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo NQO1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.