NPY CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401098-ACT

Das humane **NPY**-Gen kodiert Neuropeptid Y, einen sezernierten peptidergen Neurotransmitter, der überwiegend über G‑Protein‑gekoppelte Rezeptoren der Y‑Familie signalisiert und so neuronale Erregbarkeit, synaptische Transmission sowie neuroendokrine Outputs reguliert. NPY ist ein zentraler Modulator der Energiehomöostase, des Fressverhaltens, zirkadianer und Stressreaktionen sowie der autonomen Kontrolle und wirkt nachgeschaltet auf cAMP‑ und calciumabhängige Signalwege in neuralen und peripheren Geweben. Neben Funktionen im zentralen Nervensystem beeinflusst NPY auch den Gefäßtonus und die Aktivität von Immunzellen und verknüpft damit neuroimmune und kardiometabolische Signalwege. Eine fehlregulierte NPY‑Signalgebung wurde mit neuropsychiatrischen Phänotypen, adipositasassoziierten Merkmalen und der Biologie kardiovaskulärer Risiken in Verbindung gebracht, wodurch NPY häufig als Marker und funktioneller Knotenpunkt in mechanistischen Studien verwendet wird.

NPY Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NPY-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NPY Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NPY-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NPY-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NPY-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NPY-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NPY-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NPY-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NPY-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.