NPY Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401098-ACT

NPY umano codifica il neuropeptide Y, un neurotrasmettitore peptidico secreto che segnala principalmente attraverso recettori accoppiati a proteine G della famiglia Y per regolare l’eccitabilità neuronale, la trasmissione sinaptica e le risposte neuroendocrine. NPY è un modulatore chiave dell’omeostasi energetica, del comportamento alimentare, delle risposte circadiane e allo stress e del controllo autonomico, con effetti a valle sulla segnalazione mediata da cAMP e sui circuiti calcio-dipendenti nei tessuti neurali e periferici. Oltre alle funzioni nel sistema nervoso centrale, NPY influenza il tono vascolare e l’attività delle cellule immunitarie, collegando i percorsi neuroimmuni e cardiometabolici. Un’alterata regolazione della segnalazione di NPY è stata associata a fenotipi neuropsichiatrici, tratti legati all’obesità e alla biologia del rischio cardiovascolare, rendendolo un marcatore ampiamente utilizzato e un nodo funzionale per studi meccanicistici.

NPY Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NPY senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NPY Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NPY nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NPY, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NPY. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NPY nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NPY nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NPY nelle cellule tumorali con espressione di NPY silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.