Notum CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (m): sc-429545

개요

Notum은 분비성 카복실에스터레이스를 암호화하며, Wnt 리간드에 붙어 있는 팔미톨레산(palmitoleate)기를 탈아실화(deacylation)함으로써 Wnt 신호를 약화시킵니다. 이로 인해 리간드–수용체 결합이 감소하고, 하위의 β-카테닌 의존적 전사가 줄어듭니다. 생쥐에서 NOTUM은 정준적 Wnt/Frizzled–LRP 신호를 조절함으로써 배아 패터닝, 조직 항상성, 줄기세포 니치 활성의 조절에 기여합니다. NOTUM 활성의 변화는 골 리모델링, 장 상피 동역학, 신경발달 과정 등 다양한 맥락에서 Wnt 경로 출력의 이상 조절과 연관되어 왔습니다. Wnt 경로의 ‘브레이크’로서 Notum은 경로 피드백 조절과 미세환경에 의한 증식·분화 제어 연구에서 자주 다뤄집니다.

Notum CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m)는 mouse 세포주에서 Notum 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 Notum 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 Notum의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 Notum 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 Notum 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 Notum 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• Notum 기능에 중요한 Notum 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 Notum 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• Notum CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m) 및 Notum CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는 gRNA는 Notum 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  Notum HDR 플라스미드 (m) 및 Notum HDR 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 Notum 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 Notum 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.