Nopp140 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402907-ACT

NOLC1 codifica a Nopp140, uma fosfoproteína do nucléolo e dos corpos de Cajal que atua como um arcabouço para a montagem de ribonucleoproteínas e o tráfego intranuclear. A Nopp140 participa da biogênese de ribossomos ao coordenar a dinâmica de snoRNPs, o processamento de pré-rRNA e a organização nucleolar, e também dá suporte à maturação de snRNPs do spliceossomo por meio de interações com os corpos de Cajal. Sua atividade é regulada por fosforilação extensiva e está ligada a programas transcricionais dependentes da RNA polimerase I, a respostas ao estresse nucleolar e ao controle de crescimento acoplado ao ciclo celular. A desregulação da homeostase nucleolar e de vias de processamento de RNA envolvendo NOLC1/Nopp140 é relevante para estudos de sinalização proliferativa, estabilidade genômica e remodelamento adaptativo ao estresse da expressão gênica em células humanas.

Nopp140 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NOLC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nopp140 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NOLC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NOLC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nopp140. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NOLC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nopp140 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nopp140 em células tumorais com expressão de NOLC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.